熒光顯微成像系統是一種利用熒光原理來觀察和分析微觀世界的技術工具,能夠檢測到非常微弱的熒光信號,從而觀察到低濃度的熒光物質或微小的生物結構;可以區分出非常接近的物體或結構,使研究者能夠清晰地觀察到細胞內部的細微結構和分子水平的相互作用。
熒光顯微成像系統的組成:
1.顯微鏡主體:包括物鏡、目鏡、載物臺等基本部件,用于放大和聚焦觀察標本。物鏡的數值孔徑決定了其集光能力和分辨率,一般數值孔徑越高,分辨能力越強。
2.光源:提供特定波長的激發光,常見的有高壓汞燈、金屬鹵化物燈、氙燈以及激光等。不同的光源具有不同的光譜特性和功率,可根據實驗需求選擇合適的光源。
3.濾光片組:由激發濾光片、發射濾光片和二向色鏡組成。激發濾光片用于選擇特定波長的激發光照射標本;發射濾光片只允許特定波長范圍的熒光通過,到達探測器;二向色鏡則反射激發光并透過熒光。
4.探測器:如光電倍增管、電荷耦合器件(CCD)或互補金屬氧化物半導體(CMOS)等,用于檢測和記錄熒光信號,并將其轉化為電信號輸出。
5.數據處理與顯示裝置:對探測器獲取的電信號進行處理和分析,生成數字圖像,并在計算機顯示器上顯示出標本的熒光顯微圖像。還可以進行圖像的進一步處理、測量和分析等操作。
熒光顯微成像系統的使用注意事項:
1.為了獲得觀察效果,熒光顯微鏡通常需要在暗室中操作,以減少外界光線的干擾。
2.激發光長時間照射樣品可能會導致樣品熒光漂白或損傷,因此應盡量避免長時間照射同一區域。
3.遵循正確的開關機順序,通常先開低壓汞燈,關閉時則相反。同時,每次關閉汞燈后需等待一段時間(一般為30分鐘以上)才能再次開啟,以延長汞燈的使用壽命。
4.定期對顯微鏡進行清潔和維護,包括擦拭鏡頭、更換濾光片和燈泡等,以確保儀器的性能和精度。
5.在使用高壓汞燈或其他光源時,要注意安全操作,避免觸電或燙傷等危險情況的發生。同時,要遵守實驗室的安全規定和操作規程。